南方水产科学

作者：程伊梦, 孙慧慧, 刘淇, 赵玲, 曹荣

关键词：壳聚糖酶, 关键氨基酸位点, 序列比对, 酸碱耐受性, 同源建模

壳寡糖具有多种生物活性，是目前仅知的唯一碱性寡糖，在食品、农业和生物医药领域应用广泛。壳聚糖酶可以特异性切割壳聚糖中的β-1,4糖苷键，形成不同聚合度的壳寡糖，因此，获得具有良好稳定性的壳聚糖酶是大规模酶法制备壳寡糖的关键。为了鉴定影响糖苷水解酶 (Glycoside hydrolase, GH) 46家族壳聚糖酶酸碱耐受性的相关氨基酸位点，选取来自芽孢杆菌 (Bacillus sp.) DAU101 (最适pH为7.5) 的壳聚糖酶为模板，以来自芽孢杆菌的壳聚糖酶Csn-BAC为研究对象，综合同源建模和序列比对的方法，选取了4个候选位点并构建了4个突变体 (V1: P68A; V2: A137G; V3: A203M; V4: H234E)。结果显示，与Csn-BAC相比，4个突变体的热稳定性均出现了不同程度的下降，而酸碱耐受性有了明显的提升。结果表明，选取的氨基酸位点对酸碱耐受性均产生了显著的影响，同时表明该策略在改造壳聚糖酶稳定性方面是一种有效的方法。

来源：2022年第2期

《南方水产科学》期刊编辑部

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