南方水产科学

作者：马艳平, 郝乐, 冯国清, 梁志凌, 马江耀, 柯浩, 刘振兴

关键词：罗非鱼, 无乳链球菌, VII型分泌系统膜蛋白, 敲除菌株构建, 生物学特性分析

VII型分泌系统存在于无乳链球菌 (Streptococcus agalactiae) 中，其组成膜蛋白对底物蛋白的分泌转运至关重要。为此利用热敏型自杀质粒，构建了含氯霉素筛选标签的膜蛋白重组敲除载体pSET4s-ΔessA、pSET4s-ΔessB、pSET4s-ΔessC，经同源重组后，利用PCR技术筛选到了其缺失突变株-无乳链球菌ΔessA、ΔessB、ΔessC。通过菌株生长曲线分析，ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较野生株 (WT) 生长过程变慢，其中ΔessA、ΔessB敲除株在生长早期有显著性差异 (P<0.01)。对ESAT6蛋白分泌影响分析显示，与WT株相比，ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株ESAT6的表达量均显著下调 (P<0.01)。结果显示，ΔessA、ΔessB、ΔessC敲除株均较WT株毒力显著降低 (P<0.01)。研究表明，essA、essB、essC为无乳链球菌VII型分泌系统重要的膜蛋白，其基因缺失造成了分泌蛋白ESAT6 mRNA表达水平下降，影响了菌株毒力。

来源：2022年第4期

《南方水产科学》期刊编辑部

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