南方水产科学

作者：桂彬彬, 曲梦, 张蔚然, 李明玉, 江艳华, 姚琳, 王联珠

关键词：太平洋牡蛎, <i>CgFUT5</i>基因, 克隆, 组织表达, 原核表达

Lewis抗原被认为是诺如病毒特异性结合受体，作为诺如病毒传播载体，牡蛎中也存在着类Lewis抗原，但牡蛎合成这种碳水化合物的途径尚未阐明。为解析牡蛎中诺如病毒受体类Lewis抗原的合成路径，利用cDNA末端快速扩增 (Rapid amplification of cDNA ends, RACE) 技术克隆得到太平洋牡蛎 (Crassostrea gigas) 的CgFUT5基因全序列并进行生物信息学分析，通过实时荧光定量聚合酶链式反应 (RT-qPCR) 分析其在5种组织中的表达情况。构建原核表达质粒转化大肠杆菌 (Escherichia coli) 实现异源表达，并通过免疫印迹法 (Western blot) 鉴定免疫原性。克隆得到了具有1 173 bp开放阅读区的CgFUT5基因cDNA序列，系统发育树显示CgFUT5基因与多个物种具有合成Lewis抗原功能的岩藻糖基转移酶基因遗传学关系较近。重组CgFUT5蛋白可在大肠杆菌中过量表达，且表达的重组CgFUT5蛋白与抗人FUT5抗体及抗6×His标签抗体均能特异性结合。研究发现CgFUT5基因在牡蛎鳃组织中大量表达，CgFUT5蛋白与人FUT5蛋白具有相似的免疫原性，推测牡蛎中存在着类Lewis抗原的合成通路，并且调控牡蛎类Lewis抗原合成的基因还具有组织表达差异性。

来源：2023年第6期

《南方水产科学》期刊编辑部

查看南方水产科学杂志2023年第6期