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国内刊号：44-1683/S
国际刊号：2095-0780
发布日期:
作者：王一霖, 艾明齐, 蒋奇滨, 彭焜, 周柯宇, 樊威, 欧阳萍, 陈德芳, 黄小丽, 耿毅
关键词：鳗败血假单胞菌, 大口黑鲈, SYBR Green I real-time quantitative PCR, RAA-LFD, 菌体载量
为实现鳗败血假单胞菌 (Pseudomonas anguilliseptica, PA) 早期感染的快速诊断，基于recA基因建立了2种检测方法：SYBR Green I实时荧光定量PCR (SYBR Green I real-time quantitative PCR) 和重组酶介导等温扩增结合侧流层析试纸条 (Recombinase-mediated isothermal amplification combined with lateral flow dipstick, RAA-LFD)。以PA的管家基因recA为靶标，设计筛选出1对qPCR特异性引物、1对RAA特异性引物和RAA探针，并通过同源重组构建标准品质粒pUC18-recA，以建立2种检测方法。将所建立的方法应用于PA感染的大口黑鲈 (Micropterus salmoides) 组织样本检测，并测定PA载量。结果表明，建立的qPCR方法最低DNA检测浓度为2.816×102 拷贝·μL−1，模板量与Ct值在构建的标准曲线中呈现良好的线性关系 (r2=0.999 2)，且具有较强的特异性和较高的稳定性；RAA-LFD方法的最低DNA检测浓度为2.816×104 拷贝·μL−1，检测时间最快可达15 min，显色较为稳定且特异性强。应用结果显示，qPCR和RAA-LFD方法的阳性样本检出率分别为87.50%和85.00%，较普通PCR方法明显提高；其中，qPCR方法可准确测定PA感染宿主组织中的菌体载量，肾中的载量最高，达3.533×107 拷贝·ng−1。建立的2种方法特异性均较好，其中qPCR方法灵敏性更高，RAA-LFD方法则时效性更强，均可用于PA早期感染的检测，且qPCR方法还可对感染宿主体内的菌体载量进行定量分析。
来源：2025年第2期
《南方水产科学》期刊编辑部
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