南方水产科学

作者：闫光达, 马红玲, 徐力文, 邓益琴, 郭志勋, 冯娟

关键词：神经坏死病毒, CRISPR/Cas12a, 重组酶聚合酶扩增, 快速检测

赤点石斑鱼神经坏死病毒 (Red spotted grouper nervous necrosis virus, RGNNV) 是危害中国海水养殖鱼类的主要病原体之一，尽早检出RGNNV是防控该病毒感染和减少养殖损失的关键措施。为建立快速检测RGNNV的方法，将重组酶聚合酶扩增 (Recombinase polymerase amplification, RPA) 技术与CRISPR/Cas12a (CRISPR，成簇规律间隔短回文重复序列；Cas12a，CRISPR相关蛋白) 检测系统相结合，通过设计和筛选RPA引物与crRNA (CRISPR RNA)，优化RPA反应条件与CRISPR/Cas12a检测体系，评估该方法的灵敏度与特异性。同时，对临床石斑鱼样本进行检测，并与行业标准《SC/T 7216—2022 鱼类病毒性神经坏死病诊断方法》中规定的qPCR法进行一致性比较。结果显示，该检测方法最短可在45 min内得到结果，灵敏度为1.5×101 拷贝·µL−1，检测特异性良好，实际样本检测与行标qPCR法对比符合率为100%。研究建立的RPA-CRISPR/Cas12a-RGNNV检测方法具有快速、便捷、高灵敏度、强特异性和可视化检测结果等特点，为RGNNV的现场快速检测提供了新的技术手段。

来源：2025年第4期

《南方水产科学》期刊编辑部

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